背景

腦膠質(zhì)瘤是由于大腦和脊髓膠質(zhì)細(xì)胞癌變所產(chǎn)生的一種最常見的原發(fā)性顱腦惡性腫瘤,約占顱內(nèi)腫瘤的35%~61%。目前,雖然有手術(shù)、放療、化療、基因治療及綜合治療等多種治療方法,但因其侵襲性強(qiáng)、復(fù)發(fā)率高、位置特殊、預(yù)后差,具有很高的病死率和致殘率,嚴(yán)重威脅人類健康。腫瘤細(xì)胞所處的微生態(tài)環(huán)境是其生長不容忽視的重要因素,建立一個(gè)可靠的能模擬人腦膠質(zhì)瘤微環(huán)境以及生物學(xué)特性的動(dòng)物模型,是進(jìn)一步了解和研究膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制及治療方法的基礎(chǔ)和前提。

01造模方法:

腦內(nèi)原位接種整個(gè)接種過程在層流超凈臺(tái)進(jìn)行,接種部位為裸鼠右側(cè)大腦尾狀核。裸鼠經(jīng)0.8%的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(20mL/kg),俯臥位將其頭部固定在腦立體定向儀上。75%乙醇消毒頭頂部皮膚后,先于顱中線處眼裂后開1個(gè)垂直切口,暴露前囟。接種部位取前囟中點(diǎn)前1mm、矢狀縫向右旁開2.5mm處,用直徑為1mm的動(dòng)物顱骨鉆小心鉆穿顱骨,然后用吸有5uL瘤細(xì)胞懸液的微量進(jìn)樣器經(jīng)孔垂直進(jìn)人腦白質(zhì)區(qū)中,進(jìn)針深度為針尖距顱骨表面3.5mm,注射前將針稍微退回約0.5mm,以0.5uL/mim注射速度將瘤細(xì)胞懸液緩慢注入,除針前停留2min后緩慢拔針,用骨蠟封閉骨孔,生理鹽水沖洗術(shù)野,縫合頭皮,最后用碘酒消毒。正常對(duì)照組接種時(shí)以同體積Hanks液替代。術(shù)后先將裸鼠置于37℃恒溫板上保溫,待蘇醒后再放回籠中,術(shù)后無需抗感染治療,每天觀察其生活狀態(tài),包括精神、飲食、活動(dòng),體質(zhì)量等情況。

02注意事項(xiàng):

本模型制備的結(jié)果受多種因素的影響,為保證造模成功,造模過程要注意:①保證細(xì)胞活力及接種數(shù)量。保證細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確,盡量使細(xì)胞懸液的制備和裸鼠的麻醉、消毒、固定定位同時(shí)進(jìn)行,以保證細(xì)胞懸液在最短時(shí)間內(nèi)接種至裸鼠體內(nèi)。另外,整個(gè)接種過程中要將細(xì)胞懸液置于冰上保存,用時(shí)搖勻,避免細(xì)胞貼壁、堆積,保持濃度均勻。②選擇合適的接種部位。我們將人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-MG接種于裸鼠右側(cè)大腦尾狀核,坐標(biāo)為前囟中點(diǎn)前1mm、矢狀縫向右旁開2.5mm,深度為硬膜下3mm。選擇此注射點(diǎn)的目的是保證腫瘤能在該位點(diǎn)的前后,左右、上下方向有足夠的生長空間、從而保證腫瘤生長的大小和良好的生長形態(tài)。采取立體定向儀下準(zhǔn)確的定位,既保證足夠的深度,又防止腫瘤細(xì)胞進(jìn)入側(cè)腦室。3.防止腫瘤細(xì)胞沿針道擴(kuò)散,我們采用進(jìn)針3.5mm、回退0.5mm的方法,保證足夠的接種空間;0.5uL/min的緩慢注射速度、注射后停針2min和骨蠟封閉骨孔的方法,防止細(xì)胞懸液外溢,保證準(zhǔn)確的細(xì)胞接種數(shù)量④防止動(dòng)物模型感染。整個(gè)手術(shù)過程在層流超凈臺(tái)進(jìn)行,術(shù)前75%乙醇消毒頭頂部皮膚,術(shù)后碘酒消毒傷口。本實(shí)驗(yàn)建立人腦膠質(zhì)瘤原位移植裸鼠模型的關(guān)鍵在于準(zhǔn)確定位接種點(diǎn)和嚴(yán)格控制接種量,同時(shí)要特別注意注射和拔針的速度以及停針時(shí)間,只有保證了瘤細(xì)胞的接種位置和接種數(shù)量的一致性,才能確保移植縮生長的一致性、穩(wěn)定性和可比性。實(shí)驗(yàn)采用的動(dòng)物為免疫缺陷動(dòng)物,飼養(yǎng)環(huán)境要求高。

小動(dòng)物成像圖

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